精宏水浴鍋用于基因型分析

    擁 有 豐 富 多 樣 的 S 基 因型。到目前為止，只是鑒定了其中的一部分， 還有很多梅品種資源的 S-RNase 基因型與 SFB 基因型以及新基因有待進(jìn)一步鑒定和挖掘。本 研究擬采用 AS-PCR 技術(shù)鑒定梅 S-RNase 基 因 型、SFB 基 因 型 和 挖 掘 新 的 基 因，為 梅 授 粉 品 種 的 合 理 選 擇 提 供 指 導(dǎo)，并 為 高 效 育 種 提 供 依據(jù)。上海復(fù)日科技公司生產(chǎn)的 FR200 紫外透射儀，購自上海凈信事業(yè)發(fā)展有限公司 的多樣品組織研磨儀 -24，北京市六一儀器廠 DYY6C 型瓊脂糖凝膠電泳儀，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備 DKS24 型恒溫水浴鍋，Eppendorf 5415D 型高速冷凍離 心 機(jī)，核 酸 蛋 白 分 析 儀（Eppendorf），Mastercycler nexus PCR 儀為 Eppendorf 公司生產(chǎn)的，C.B.S. 公司 DH-400-33 型電泳槽。

    使用引物 Pru-C2、PCE-R 對 11 個品種的葉片 DNA 進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，利用 1.5% 的瓊脂糖膠觀察 11 個梅品種擴(kuò)增的 PCR 產(chǎn)物，發(fā)現(xiàn)每個品種均得 到了兩條不同的目的條帶。所有的目的條帶 集中在 260~1836 bp，并且表現(xiàn)出一定的長度多態(tài) 性。至于這 11 個梅品種的 S-RNase 基因類型的確 定，還需要進(jìn)一步的序列分析。運(yùn) 用 DNAMAN 軟件在核苷酸序列的基礎(chǔ) 上，推 導(dǎo) 出 2 個新得到的 S-RNase 基因相對應(yīng)的 氨基酸序列。對本次研究中鑒定出的各個梅品種 S-RNase 基因與 SFB 基因進(jìn)行種內(nèi)氨基酸序列比 對，分 別 得 到 56.52%~89.29%、73.99%~84.83% 的 同源性；而將其與其他李屬植物的 S-RNase 基因 與 SFB 基因進(jìn)行比對，則分別具有 58.57%~100%、 61.03%~97.20% 的 同 源 性。 如 PmS24- RNase 和 PsS24-RNase 之間具有 100% 的最大同源 性。整個進(jìn)化樹，SFB 基因種間同源性大于種內(nèi)同 源性，如 PmSFB53 與 PdSFB13 之間具有 100% 的最 大同源性。這種現(xiàn)象說明 S-RNase 基因與 SFB 基因的多態(tài)性存在于李屬植物的進(jìn)化過程中。