正常小鼠免疫功能的分析（精宏DKB-501使用）

多糖是由多個(gè)單糖分子以糖苷鍵結(jié)合而成的天然大 分子化合物，廣泛存在于動、植物及微生物體內(nèi)，在抗肝 炎、抗病毒、抗腫瘤、抗心血管疾病、抗衰老、提高免疫力、 降糖等方面具有特殊的生物活性。靈芝、螺旋藻和鎖陽 的主要活性成分之一均是多糖。如靈芝多糖能夠增強(qiáng)腫瘤 小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬功能，促進(jìn)淋巴細(xì)胞增生，增強(qiáng) T 殺 傷細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，促進(jìn)細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素等；螺 旋藻多糖能增強(qiáng)小鼠骨髓細(xì)胞增殖能力，促進(jìn)胸腺、脾臟等 免疫器官的生長和促進(jìn)血清蛋白的生物合成；鎖陽多糖能 提高衰老小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力和脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力。

1 材料與儀器 

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 

健康昆明種雄性小鼠，8~10 周齡，體質(zhì)量（20±2） g， 由蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動物中心提供。動物合格證號為: 甘醫(yī)動字第 14-006。 1.2 儀器 DKB-501 數(shù)顯超級恒溫水浴鍋 （上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；微量進(jìn)樣器（上海安亭微量進(jìn)樣器廠）；游標(biāo)卡 尺（安徽量具刀具廠）；AL204 電子天平[梅特勒—托利多 儀器（上海）有限公司]；722 型可見光光度計(jì)（上海光譜儀 器有限公司）；DD5M 立式大容量離心機(jī)（湖南凱達(dá)科學(xué)儀 器有限公司）；SKJH-2112 超凈工作臺（上海蘇坤實(shí)業(yè)有限 公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；冷凍干燥機(jī)。 

1.3 材料與藥品 

螺旋藻干粉、靈芝干粉、鎖陽干粉，均由甘肅省微藻工 程技術(shù)研究中心提供；綿羊紅細(xì)胞（SRBC）、豚鼠血清、小 牛血清均購自北京元亨金馬生物科技開發(fā)有限 公 司）； 95%乙醇、氯仿、正丁醇、葡糖糖、5%苯酚、濃硫酸、氯化 鈉、氯化鉀、硫酸鎂、氯化鎂、氯化鈣、磷酸氫二鈉、磷酸二 氫鉀、碳酸氫鈉、檸檬酸鈉均為分析純。 1.4 方法與步驟 1.4.1 螺旋藻、靈芝、鎖陽 3 味單味藥的粗多糖提取 稱取 螺旋藻、靈芝、鎖陽干粉各 100 g，分別按料液比 1∶10 分別加 入蒸餾水浸泡 2 d，各加入 1 g 纖維素酶和 1 g 果膠酶，50 ℃ 水浴提取，過濾，離心 10 min，取上清液。循環(huán)提取 2 次，合并 上清液，減壓濃縮，Sevage 法除蛋白，乙醇沉淀，真空冷凍干 燥，分別獲得螺旋藻、靈芝、鎖陽單味藥的粗多糖干粉。 1.4.2 螺旋藻、靈芝和鎖陽的復(fù)合粗多糖制備 采用硫 酸-苯酚法分別測定螺旋藻、靈芝、鎖陽 3 味單味藥的粗多 糖含量。螺旋藻粗多糖含糖量為 30.8%，靈芝粗多糖含糖 量為 44.9%，鎖陽粗多糖含糖量為 40.9%。將分別制備的 螺旋藻粗多糖干粉、靈芝粗多糖干粉和鎖陽粗多糖干粉，按 照多糖含量為 1∶1∶1 的比例制成復(fù)合多糖，4 ℃冷藏備用。 1.4.3 動物分組及給藥 將小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為 5 組，每 組 10 只，分別為正常對照組，螺旋藻多糖組（100 mg/kg·bw）， 復(fù)合粗多糖低劑量組（50 mg/kg·bw）、中劑量組（100 mg/kg·bw）、 高劑量組（200 mg/kg·bw），連續(xù)灌胃 21 d，正常對照組灌 胃生理鹽水。

2 效果

與正常對照組相 比，螺旋藻多糖組與復(fù)合粗多糖組均可顯著提高正常小鼠 的脾指數(shù)與胸腺指數(shù)（P<0.05），且隨著復(fù)合粗多糖劑量的 增加，脾指數(shù)與胸腺指數(shù)呈劑量效應(yīng)；復(fù)合粗多糖組與螺 旋藻多糖組比較，中劑量復(fù)合粗多糖組、高劑量復(fù)合粗多 糖組的脾指數(shù)與胸腺指數(shù)顯著高于螺旋藻多糖組（P<0.05）， 低劑量復(fù)合多糖組脾指數(shù)與胸腺指數(shù)均略高于螺旋藻多 糖組，差異不顯著（P>0.05）。表明粗多糖能提高小鼠的脾指數(shù)與胸腺指數(shù)，中劑量復(fù)合粗多糖、高劑量復(fù)合粗多糖 比單味藥螺旋藻多糖效果更顯著。

3 分析 

3.1 不同來源的多糖具有各自的生物活性

現(xiàn)代研究證 明，一些多糖共同作用時(shí)，效果比單一多糖更佳，藥效呈現(xiàn) 協(xié)同性。目前，對復(fù)合多糖的研究主要集中在抗腫瘤及免 疫調(diào)節(jié)作用方面。 

3.2 分別灌胃單味藥螺旋藻多糖以及螺旋藻、靈芝和鎖陽 的復(fù)合多糖

均可可增加小鼠免疫器官指數(shù)，提高腹腔巨 噬細(xì)胞的吞噬功能，增強(qiáng)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)以及提高血 清半數(shù)溶血值。其機(jī)制可能因?yàn)槎嗵亲鳛榉翘禺惪乖碳ば∈罅馨图?xì)胞的增殖而提高機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫功 能；通過促進(jìn)腹腔巨噬細(xì)胞的增值和激活巨噬細(xì)胞的吞噬 功能，提高正常小鼠非特異性免疫功能。各指標(biāo)均反映中 劑量、高劑量復(fù)合多糖組作用顯著高于單味藥螺旋藻多糖 組，與黃芪、酵母胞壁和蟲草菌絲體復(fù)合多糖以及香菇、靈 芝、灰樹花復(fù)合多糖的研究結(jié)果一致，可見復(fù)合多糖能 協(xié)同、高效地調(diào)節(jié)正常小鼠免疫機(jī)能。

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