蒲公英中綠原酸酶法提取工藝研究

蒲公英 （拉丁學(xué)名 Taraxacum mongolicum Hand.- Mazz.） 菊科，蒲公英屬多年生草本植物。根呈圓錐 狀，表面棕褐色，皺縮，葉邊緣有波狀齒或羽狀深裂， 基部漸狹成葉柄，葉柄及主脈常帶紅紫色，花葶上部 為紫紅色，密被蛛絲狀白色長柔毛；頭狀花序，總苞 鐘狀，瘦果暗褐色，長冠毛白色，花果期為 4 月— 10 月。根據(jù)我國植物志記載，蒲公英屬有 2 000 多 種，在中國分布有 70 多種，廣泛分布于東北、華 北、華中、西北和西南的各省區(qū)。

1 材料與方法

1.1 主要材料

蒲公英、圣女果、纖維素酶、綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品、 95%乙醇、氫氧化鈉、抗壞血酸、酚酞，實驗室提供。

1.2 主要儀器

數(shù)顯恒溫水浴鍋，金壇市醫(yī)療儀器廠產(chǎn)品；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品；分析天平， 上海越平科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海精宏實驗設(shè)備有限公司產(chǎn)品；臺式高速 離心機，長沙湘智離心機儀器公司產(chǎn)品。

1.3 試驗方法

1.3.1 蒲公英綠原酸提取工藝流程

制樣→加纖維素酶混合→水浴→滅酶→過濾→ 減壓濃縮→定容→分光光度法。

1.3.2 操作要點

（1） 制樣。在低溫的條件下，烘干粉碎蒲公英。 然后將粉碎后的蒲公英過 80 目篩。
（2） 混合。稱取 2 g 蒲公英干粉，加入一定量的纖維素酶和體積分?jǐn)?shù) 60%乙醇混合均勻。
（3） 水浴。用保鮮膜封口，并且恒溫水浴一定 時間。
（4） 滅酶。當(dāng)水浴反應(yīng)一段時間后，立即將錐形 瓶用沸水浴滅酶 5 min，并且將錐形瓶冷卻至室溫。
（5） 過濾。用減壓過濾裝置，過濾樣品，并且 用少量的體積分?jǐn)?shù) 60%乙醇潤洗抽濾瓶。
（6） 減壓濃縮。將過濾好的樣品，放進旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)儀中。調(diào)整旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀轉(zhuǎn)速和溫度 （50 ℃），時間 （20 min） 得到濃縮液，記錄濃縮液體積。
（7） 定容。用體積分?jǐn)?shù) 60%乙醇，將 0.1 mL 的 濃縮液緩慢定容至 10 mL。
（8） 測定。于波長 327 nm 處測定其吸光度，并 且做 3 次平行，計算綠原酸含量。

1.3.3 蒲公英綠原酸提取工藝研究

以纖維素酶添加量、料液比、酶解溫度、酶解 時間為影響因素。以綠原酸提取率為評價指標(biāo)，研 究 4 個變量對蒲公英綠原酸提取率的影響，確定最 佳提取工藝。

1.3.4 綠原酸對圣女果保鮮作用研究

以圣女果為研究材料，將圣女果分為 9 份，每 份大概 500 g，分別用質(zhì)量濃度 25，50 mg/L 的綠原 酸溶液噴灑在圣女果上，以蒸餾水處理作為對照， 自然晾干，重復(fù) 3 組平行。在第 1，3，5，7，9， 11，13，15 天分別測定圣女果的失質(zhì)量率、維 C 含 量、可滴定酸含量、可溶性固形物含量、好果率，對 不同質(zhì)量濃度綠原酸對圣女果的保鮮效果進行研究。

2 結(jié)果與分析

蒲公英綠原酸的提取率，隨纖維 素酶添加量的增加，綠原酸提取率呈現(xiàn)先上升后下 降的趨勢。纖維素酶添加量為 0.8%~1.0%時，綠原 酸的提取率逐漸升高達到最高值。這可能是由于纖 維素酶添加量增高，能夠充分分解蒲公英細(xì)胞壁中 的纖維素，綠原酸更好地溶出。所以，選取纖維素 酶添加量 1%為提取的最佳添加量。選取纖維素酶添 加量為 0.8%，1.0%，1.6%這 3 個水平進行正交試驗 結(jié)果分析。蒲公英綠原酸的提取率，隨酶解 溫度的升高呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢。當(dāng)酶解溫度 低于 50 ℃時，隨著酶解溫度的升高，纖維素酶的活性 逐漸變高，其綠原酸的提取率逐漸增加；在 50 ℃的時 候，酶的活性最強，綠原酸的提取率達到了最大值； 當(dāng)酶解溫度超過 50 ℃時，蒲公英綠原酸的提取率， 穩(wěn)定性下降。可能是因為酶的活性受反應(yīng)溫度的影 響，溫度過高使酶失活。同時，酶解溫度過高，綠 原酸受熱被破壞。因此，選取酶解溫度 30，40，50 ℃ 這3 個水平進行正交試驗結(jié)果分析。在其他條件不變的情況下，當(dāng)料液 比逐漸增加，綠原酸的提取率先增加后逐漸減少。 低于 1∶16 時，隨著料液比的增加，綠原酸的提取 率逐漸增加，這可能是因為乙醇將綠原酸更好地溶 出；當(dāng)料液比超過 1∶16 時，綠原酸提取率穩(wěn)定下 降。可能是因為料液比過高，綠原酸質(zhì)量濃度下降。 因此，選取料液比為 1∶14，1∶16，1∶18 （g∶ mL） 這 3 個水平進行正交試驗結(jié)果分析。

3 結(jié)論

通過原料配比正交試驗和穩(wěn)定劑正交試驗得出， 當(dāng)沙棘漿添加量 25%，枸杞漿添加量 15%，蜂蜜添 加量 2%，白砂糖添加量 6%，黃原膠添加量 0.06%， CMC- Na 添加量 0.04%，果膠添加量 0.07%時，所制 得的產(chǎn)品色澤呈橙黃色；氣味清香宜人，具有沙棘 和枸杞獨特的香氣，無異味；口感細(xì)膩、酸甜適口； 組織狀態(tài)均勻，穩(wěn)定性較好，無分層、沉淀現(xiàn)象。