淺談提取物的抑菌活性

蔓荊子( Vitex trifolia Linn． ) 屬馬鞭草科( Verbenaceae) 牡荊屬( Vitex Linn． ) ，最初收錄在《神農本 草經》中，廣泛分布于我國的沿海沙灘地，其化學活性組分包括萜類、茨烯、脂肪酸、氨基酸、黃 酮酚類和微量元素等。關于蔓荊子的研究主要集中在醫用活性方面，據報道蔓荊子有治療頭痛、 免疫性炎癥、降壓、防癌和腫瘤、祛痰平喘、抗衰老、抗病毒等功效。

單葉蔓荊子采自海南省?？谑胁h棋子灣，采回后將葉與種子分開，置于陰涼 處晾干，在干燥箱(上海精宏DHG-9023A鼓風干燥箱)中40 ～ 60 ℃烘干3 d，經粉碎機粉碎后稱重并密封，置于0 ～ 4 ℃冰箱中保存備用。主要 供試菌種: 水稻稻瘟病菌( Magnaporthe oryzae) 、橡膠炭疽病菌( Colletotrichum gloeosporioides Penz． Sace) 、黃 瓜枯萎病菌( Fusarium omysporum( Schl) f． sp cucumerinum) 、小麥赤霉病菌( Fusarium graminearum) 、蘋果 輪紋病菌( Botryosphaeria dothidea) 和芒果蒂腐病菌( Botryodiplodia theobromae) 、香蕉枯萎病菌( Fusarium oxysporum f． sp． cubense，Foc) 、芒果炭疽病菌( Colletotrichum gloeosporioides Penz) 、火龍果黑斑病菌( Bipolaris cactivora ( Petrak) Alcorn) 、香蕉炭疽病菌( Colletotrichum musae( Berk＆Curt) Arx) 、葡萄潰瘍病菌( Botryosphaeria dothidea) 和番木瓜炭疽病菌( Colletotrichum gloeosporioides) ，均由海南大學農藥實驗室提供。試 驗對照藥劑: 殺菌劑苦參堿( 水劑，有效成分≥0． 3% )

采用冷浸法制備單葉蔓荊子粗提物: 取植物樣品種子和葉子，置于烘箱 內烘干 3 d，粉碎后稱重。取上述種子和葉子粉末，加入適量丙酮( 以浸過植物材料為宜) 在 25 ℃ 條件下 浸漬提取 72 h，抽濾 3 次，合并濾液減壓濃縮，得到單葉蔓荊子種子和葉部的丙酮浸膏。

分別稱取單葉蔓荊子種子和葉部浸提膏 1． 4 g，加入 2 mL 丙酮，用無菌水定容至 7 mL，配制成 200 g·L － 1 母液，備用; 將 19 mL PDA 培養基裝于 50 mL 錐形瓶中，121 ℃滅菌 30 min，待培 養基冷卻后加入 1 mL 單葉蔓荊子提取物，混勻，分別倒入 3 個 6 cm 培養皿中，制成最終濃度為 10 g·L － 1 的含毒培養平板。以含有相同濃度的丙酮做陽性對照，以含有 0． 01 g·L － 1 的苦參堿為陰性對照。

分別將供試靶標真菌接種于 PDA 培養基上適溫培養 3 d，用直徑 為 5mm 的打孔器打取菌餅，接種于上述培養平板中央。適溫培養 3 d，用十字交叉法測量菌落直徑，按照 下列公式計算抑菌率。

病菌生長抑制率 = ( 對照菌落直徑 － 處理菌落直徑) / 對照菌落直徑 × 100%

按照 1． 3 中方法將單葉蔓荊子種子粗提物配制成質量濃度 為 400，200，100，50，25 g·L － 1 ，分別移取 1 mL 加入至 19 mL 滅菌的 PDA 中，搖勻后迅速分裝于 3 個 6 cm 的培養皿中，待培養基凝固后分別接入直徑為 5 cm 的小麥赤霉病菌、蘋果輪紋病菌菌種。25 ℃ 培養 72 h，十字交叉法測量菌落直徑，按照 1． 4 中公式計算抑菌率，建立毒力回歸方程，求 EC50。

采用生長速率法測定單葉蔓荊子葉部粗提物對水稻稻瘟病 菌等 6 種植物病原真菌的抑菌活性，結果( 表 1) 發現: 該粗提物對不同靶標菌抑菌活性不同，其中對小麥 赤霉病菌抑菌效果最好，培養后期抑菌率可達 50% ; 對橡膠炭疽病菌活性最差，培養后期對該靶標菌起到 促進生長作用?？傮w來看，單葉蔓荊子葉部粗提物對供試靶標菌抑菌活性均低于陽性對照( 苦參堿) 。

結果發現: 該粗提物對供試的 8 種靶標菌均有不同程度的抑 菌活性，尤其對小麥赤霉病菌和蘋果輪紋病菌持效性好，測試時間內對小麥赤霉病菌抑菌率可達 70% ，對 蘋果輪紋病菌抑菌率達 60% 以上; 此外，該粗提物對水稻稻瘟病菌培養 24 h 抑菌率可達 83． 56% ，后期雖 然抑菌效果有所下降，但抑菌率仍在 60% 左右; 該粗提物對橡膠炭疽病菌、芒果炭疽病菌、火龍果黑斑病 菌及番木瓜炭疽病菌均表現出促進菌絲生長的作用。所獲得的數據整體來看，單葉蔓荊子種子粗提物普 遍低于陽性對照( 苦參堿) 。

小麥赤霉病是小麥在全世界普遍發生的主要病害之一，已成為影響小麥高質量、高產量的重大隱患， 若防治不當會造成小麥減產乃至絕收等情況; 蘋果輪紋病又稱粗皮病、輪紋爛果病，是蘋果主要病害之 一，主要危害部位在樹干和果實，植株得病后，其樹勢、果實會嚴重的削弱和腐爛，后果不容忽視。生物 防治植物病害因具備對生態環境影響小，低殘留、無污染的等優點越來越受到人們重視。本研究發現單 葉蔓荊子葉子粗提物對供試靶標菌影響力不同，尤其對小麥赤霉病菌和蘋果輪紋病菌抑菌活性高、持效 性長，具有進一步開發應用的潛在價值。



 

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