總黃酮含量測定及不確定度評定

試驗樣品在制備、測量過程中，通常會因操作或者 測量用具等原因而不可避免的產生誤差，因此多數測 量值只能反映出真實值的近似值。不確定度是合理的 表征賦予被 測 量 值 的 分 散 性 與 測 量 結 果 相 關 聯 的 參 數，是 一種科學、合理的質量控制 方法和驗證手段，能夠較為準確的評估測量結果。

儀器與試藥

１ 儀 器

ＡＥ２４０分析天平（梅特勒－托利多公司），ＤＫ－Ｓ２６電 熱 恒 溫 水 浴 鍋（上海精宏實驗設備有限公司），ＵＶ－２５５０紫外分光光度計（日本島津公司）， 玻璃器皿為天玻牌 Ａ 級。

２ 試 劑 與 試 藥

柴 胡 利 膽 顆 粒 （自 制，批 號 １８０３２０，１８０３２６，１８０４０９），黃芩苷對照品（中國藥品生物 制品 檢 定 所，批 號１１０７１５－２００５１４，含 量 測 定 用），乙 醇 （上海沃凱生物技術有限公司，分析純），無水乙醇（廣東 翁江化學試劑有限公司，分析純），純化水（自制）。

方法與結果

１ 溶液的制備

１．１ 對照品溶液的制備

精密稱取黃芩苷對照品 １０．４７ｍｇ，以無水乙醇定容于５０ｍｌ容量瓶中，再精密 量取５ｍｌ至１０ｍｌ容量瓶中，加無水乙醇至刻度線， 搖勻，即得。

１．２ 供試品溶液的制備

取 本 品１８．７３１５ｇ，精 密 加入７０％乙醇５０ｍｌ，熱回流提取３次，每次１ｈ，收集 提取液，過濾，合并，蒸干，用無水乙醇溶解，定容于５０ ｍｌ容量瓶中，加無水乙醇定容至刻 度 線，搖 勻 后 精 密 移取５～５０ｍｌ容量瓶中，加無水乙醇至刻度線，搖勻， 即得。

１．３ 陰 性 樣 品 溶 液 的 制 備

取 用 黃 芩 陰 性 樣 品 １８．８７３４ｇ，照“１．２ 供試品溶液的制備”法，制備陰性樣 品溶液，備用。

２ 檢測波長選擇

分別取對照品溶液、供試品溶 液和陰性樣品溶液，在２００～４００ｎｍ 范圍進行紫外全 波長掃描，結果顯示，黃芩苷對照品溶液與供試品溶液 光譜圖基本一致，且陰性無干擾，最終選擇檢測波長為 ２７８ｎｍ。

３ 線性及線性范圍的考察

精密吸取對照品溶 液１．０、２．０、４．０、６．０、８．０ｍｌ，分別置于１０ｍｌ容量瓶中， 加無水乙醇稀釋到刻度，搖勻，分別取上述溶液，采用 ＵＶ－Ｖｉｓ進行測定，以吸光度 Ａ（Ｙ）為 縱 坐 標，黃 芩 苷 濃度（ｍｇ／ｍｌ）（Ｘ）為橫坐標繪制標準曲線。

４ 方法學驗證

４．１ 精密度和重復性試驗

精 密 吸 取“１．２”項 下 供試品，在２７８ｎｍ 波 長 下，連 續 測 定５次，其 吸 光 度 的 ＲＳＤ％＝０．６４％，表明精密度良好。

４．２ 穩定性試驗

精密吸取“１．２”項下供試品，在 ２７８ｎｍ 波長下，分別于０、１、３、６、９、１２ｈ測定，測定６ 次，其吸光度的 ＲＳＤ％＝０．７７％，表 明 溶 液 在１２ｈ內 的穩定性良好。

４．３ 重現性試驗

取同一批次的柴胡利膽顆粒５ 份，分別按“１．２”項下平行制備 供 試 品 溶 液，依 法 進 行 測定，結果 ＲＳＤ％＝１．２６％，表明樣品重現性良好。

４．４ 回收率試驗

精密稱取已知含量的供試品５份，分別精密加入黃芩苷對照品，照“１．２”項 下 制 備 供 試品溶液，依法測定其中總黃酮含量。

討 論

不確定度的評定，與方法學驗證一樣，將成為分 析領域的重點和難點，２０２０年版藥典擬增加《藥品檢 測結果的不確定度評定指導原則》的 征 求 意 見 稿， 可見不確定度評定越來越受重視。