仙茅鹽炙工藝的優化-DHG-9140A使用

仙茅為石蒜科植物仙茅 Curculigo orchioides Gaertn． 的干燥根莖，始載于 《雷 公 炮 炙 論》， 其性辛、溫，味苦，有毒，歸肝、腎經，具有 補腎助陽、益精血、強筋骨、行血消腫的功效。現 代植物化學研究表明，仙茅成分比較復雜，主要包 括酚及酚苷類、木脂素類、皂苷元及皂苷類、黃酮 類、桉烷類、脂肪族類、生物堿類、甜味蛋白、多 糖類、揮發油等; 現代藥理研究顯示，仙茅主 要具有抗氧化、抗骨質疏松、增強免疫、補腎壯 陽、抗炎、抗憂郁、抗老年癡呆等作用，臨床 上多用于治療骨質疏松癥、乳腺增生、絕經后關節 炎、更年期綜合征及陽痿、再生障礙性貧血、原發 性高血壓等疾病; 中醫臨床上常用其炮制品以增強 補益作用。

1 材料

1. 1 儀器

Waters H-Class UPLC 超高效液相色譜 儀 ( 包括四元高壓梯度泵、自動進樣器、柱溫箱、 蒸發光散射檢測器、Empower2 數據處理工作站， 美國 Waters 公司) ; 電子天平 ( 瑞士 Mettler-Toledo 公司) ; FA1004B 型電子天平 ( 上海精密科學儀器有限公司) ; DHG-9140A 型電熱恒溫鼓風干燥箱 ( 上海精宏實驗設備有限公司) ; DFT-100 型高速萬能粉碎機 ( 浙江溫嶺市林大機械有限公司) 。

1. 2 試藥

仙茅購自康美藥業股份有限公司，經 遼寧中醫藥大學中藥鑒定室翟延君教授鑒定為石蒜 科植物仙茅 Curculigo orchioides Gaertn． 的 干 燥 根 莖。仙茅苷對照品 ( 中國食品藥品檢定研究院， 批號 MUST-15062710，含有量 99. 17%) ; 苔黑 酚 葡萄糖苷對照品 ( 成都曼思特生物科技有限公司， 批 號 MUST-14041601， 含 有 量 98. 81%) 。 食 鹽 ( 江蘇金橋鹽化集團古淮制鹽有限公司，GB5461) ; 甲醇、磷酸、乙腈為色譜純; 其他試劑均為分析 純; 水為超純水。

2 方法與結果

2. 1 鹽炙品制備

取適量凈仙茅段 20 g 置適宜容 器內，加入鹽水 ( 取 0. 4 g 鹽，以不同鹽水比例拌 勻) 悶潤，待鹽水被吸盡后置炒制容器內，不同 溫度下不斷翻炒一段時間，取出，放涼，打 粉， 即得。

2. 2 仙茅苷、苔黑酚葡萄糖苷含有量測定

2. 2. 1 色譜條件

ACQUITY UHPLC BEH C18 柱 ( 2. 1 mm×50 mm，1. 7 μm) ; 流動相乙腈 ( A) - 0. 1%磷酸 ( B) ，梯度洗脫 ( 0 ～ 4 min，3%A; 4 ～ 5 min，5% A; 5 ～ 5. 5 min，7% A; 5. 5 ～ 6 min， 10% A; 6 ～ 8 min，11% A; 8 ～ 8. 5 min，12% A; 8. 5 ～ 9. 5 min，13%A; 9. 5 ～ 10 min，13%A; 10 ～ 13 min，15% A; 13 ～ 15 min，15% A) ; 檢測波長 220 nm; 體積流量 0. 3 mL /min; 柱溫30 ℃ ; 進樣 量 1 μL。理論板數按仙茅苷計算應不低于 3 000。 色譜圖見圖 1。

2. 2. 2 對照品溶液制備

精密稱取仙茅苷對照品 4. 11 mg、苔黑酚葡萄糖苷對照品 2. 21 mg，置 10 mL量瓶中，甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，稀 釋得到 0. 102 75、0. 110 5 mg /mL 對照品溶液。

2. 2. 3 供試品溶液制備

稱取不同條件下鹽炙品 粉末 ( 過 3 號篩) 約 1 g，精密稱定，置圓底燒瓶 中，精密加入甲醇 50 mL，稱定質量，加熱回流 2 h，取出，放冷，稱定質量，甲醇補足減失質量， 搖勻，濾過。精密量取續濾液 20 mL，蒸干，殘渣 加甲醇溶解，移至 10 mL 量瓶中，稀釋至刻度，搖 勻，過 0. 22 μm 微孔濾膜，取續濾液，即得。

3 討論

為了更準確地檢出酚苷類成分，色譜柱考察了 ACQUITY UHPLC BEH C18 ( 2. 1 mm × 50 mm， 1. 7 μm) 和 Ultimate UHPLC AQ-C18 ( 2. 1 mm × 50 mm，1. 8 μm) ，流動相考察了甲醇或乙腈與 0. 1%磷酸或甲酸的不同比例，檢測波長考察了 220、280 nm，最終確定為 “2. 2. 1”項下條件。 酚苷類是仙茅補肝腎、強筋骨的物質基礎， 故選用其中含有量較高的苔黑酚葡萄糖苷和藥典指 標成分仙茅苷作為評價指標，并進行加權求和 ( 權重比例設為 1 ∶ 1) ，優化仙茅鹽炙工藝，具有 一定的科學性與合理性。仙茅苷和苔黑酚葡萄糖苷 作為仙茅酚苷類主要成分，含有量測定方法有薄層 層析-紫外分光光度法、高效液相色譜法、紫外分光光度法等，本實驗采用UPLC法，與 HPLC 法相比操作簡便，結果準確，重復性好。