異黃酮類化合物含量比較-精宏恒溫烘箱的使用！

葛根，始載于《神農本草經》，來源于豆科植物野 葛Ｐｕｅｒａｒｉａｌｏｂａｔａ （Ｗｉｌｌｄ．）Ｏｈｗｉ的干燥根，具有 解肌退熱、透疹、生津止渴等功效。據文獻報道， 葛根中含有豐富的異黃酮類化合物，具有很好的 擴張冠狀動脈，降低心肌耗氧量等藥理活性。安 徽省是葛根的主產區之一，尤以大別山區和皖南 山區產量大。有文 獻 報 道 不 同 產 地 的 葛 根 品 質 存在較大差異，其中安徽省不同產地的葛根中 異黃酮化 合 物 含 量 差 異 也 較 大。在產地調查過程 中，發現葛根存在兩種類型。一種葛的根系龐大，塊 根扭曲，形狀 不 規 則，纖 維 較 多，藥 農 稱 之 為“柴 性 葛”；另一種 葛 的 塊 根 分 枝 少，常 呈 紡 錘 形，粉 性 較 強，藥農稱之為“粉性葛”。其中“粉性葛”并非是 粉葛，而是野葛中粉性較強的類型。藥農認為“粉性 根”質量較差，而葛根的性狀與其質量的相關性尚不 清楚，有必要對“粉性葛”與“柴性葛”進行質量評價。

１ 儀器與試藥

１．１ 儀器

Ａｇｉｌｅｎｔ１２６０高效液相色譜儀（真空脫 氣裝置、二 元 泵、ＡＬＳ、ＴＣＣ、ＤＡＤ 和 Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎ 工作站）：Ａｇｉｌｅｎｔ公司；ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＸＤＢ－Ｃ１８色 譜柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，３．５μｍ）：美國 Ａｇｉｌｅｎｔ公 司；ＢＰ２１１Ｄ電子天平：德國Ｓｔａｒｔｏｒｉｕｓ公司；恒溫烘箱：上海精宏實驗設備有限公司；杰瑞爾 ＨＨ－６數顯 恒 溫 水 浴 鍋：浙江金壇市杰瑞爾電器有限公司； Ｍｉｌｌｉ－Ｑ 超純水儀：美國 ＭｅｒｃｋＭｉｌｌｉｐｏｒｅ公司。

１．２ 試 藥

３′－羥 基 葛 根 素 （批 號 ＣＦＮ９０２３６，純 度≥９８％）、葛根素（批號 ＣＦＮ９９１６９，純度≥９８％）、 ３′－甲氧基葛根素（批號 ＣＦＮ９０７８０，純度≥９８％）、大 豆苷（批號 ＣＦＮ９９１０１，純度≥９８％）、大豆 苷 元（批 號 ＣＦＮ９８７７４，純度≥９８％）：武漢天植生物技術有 限公司；葛 根 素 芹 菜 糖 苷 （批 號 Ｇ－０２１－１６１０１９，純 度≥９８％）：成都瑞芬斯生物科技有限公司；甲醇（色 譜純）：美國 ＴＥＤＩＡ 公司。 葛根藥材于２０１６年１２月采 集，共２６批樣 品， 經安徽中醫藥大學彭華勝教授鑒定為豆科植物野葛的根。選取采挖 葛根的粗大部位，４５ ℃烘干至恒質量，粉碎，過３號 篩，干燥保存。

２ 方法與結果

２．１ 色 譜 條 件

采 用 ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘ ＸＤＢ－Ｃ１８ （２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，３．５μｍ）色譜柱，柱溫３０℃，以 甲醇（Ａ）－０．２％醋酸水（Ｂ）為流動相，梯度洗脫（０～ ２５ｍｉｎ，２３％ Ａ；２５～３５ｍｉｎ，２３％ Ａ→４０％ Ａ；３５～４８ ｍｉｎ，４０％ Ａ→６５％ Ａ；４８～５０ ｍｉｎ，６５％ Ａ→ ２３％ Ａ），流速０．８ｍＬ／ｍｉｎ；檢測波長２５０ｎｍ，進樣量１０μＬ。對照品與樣品色譜峰見圖１。

２．２ 對照品及供試品溶液的制備

２．２．１ 混合對照品溶液的制備

以５０％甲醇制備 ３′－羥基葛根素０．０８０ｍｇ／ｍＬ、葛根素０．１６ｍｇ／ｍＬ、 ３′－甲氧 基 葛 根 素 ０．０４０ ｍｇ／ｍＬ、葛 根 素 芹 菜 糖 苷 ０．０４０ｍｇ／ｍＬ、大 豆 苷 ０．０４０ ｍｇ／ｍＬ、大 豆 苷 元 ０．００５ｍｇ／ｍＬ混合溶液，即得。

２．２．２ 供試品溶液制備

精密稱取葛根樣品粉末 ０．１ｇ，加３０％乙醇２５ｍＬ，靜置３０ｍｉｎ，稱量，加熱 回流３０ｍｉｎ，冷卻至室溫，再次稱質量，用３０％乙醇 水溶液補足減失的量，取上清液，０．４５μｍ 微孔濾膜 過濾，取續濾液，即得。

3 討論

３．１ 提取條件的優化

本研究對超聲波提取法與 加熱回流提取法進行了比較，結果表明加熱回流提 取法所得的異黃酮類成分提取率較高，故選用加熱 回流提取法。本實驗同時考察了不同提取溶劑、不 同料液比、不同 提 取 時 間，發 現 以３０％乙醇 溶 液 為 提取溶劑，采用２５０倍量，加熱回流３０ｍｉｎ，可充分 將異黃酮類成分提取，說明該提取條件簡便、合理、 可行。

３．２ 檢測波長的選擇

取３′－羥基葛根素、葛根素、 ３′－甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷、大豆苷 元的對照品溶液，用紫外分光光度計測定，于１９０～ ４００ｎｍ 波長 范 圍 內 掃 描，結 果 ６ 種異黃酮成分在 ２５０ｎｍ 處有 最 大 吸 收。因 此，將檢測波長設定為 ２５０ｎｍ。

３．３ 流動相的選擇

對 甲 醇－０．１％醋酸 水、甲 醇－ ０．２％醋酸水、甲醇－０．５％醋酸水的流動相系統進行 考察，結果表明，甲醇－０．２％醋酸水能達到分離度的 要求，分離時 間 合 適，最 后 確 定 流 動 相 為 甲 醇（Ａ）－ ０．２％ 醋酸 水（Ｂ），梯度 洗 脫（０～２５ ｍｉｎ，２３％ Ａ； ２５～３５ ｍｉｎ，２３％ Ａ→４０％ Ａ；３５～４８ ｍｉｎ，４０％ Ａ→６５％ Ａ；４８～５０ｍｉｎ，６５％ Ａ～２３％ Ａ）。

３．４ 樣品測定結果分析

實驗結果表明，安徽省不 同產地之間葛根中各成分含量差異較大。實驗中所 測定的１５個產地的葛根樣品存在兩種性狀類型：一 種纖維性較強，當地藥農稱之為“柴性葛”；另一種粉 性較強，當 地 稱 之 為“粉 性 葛”。“柴性 葛”與“粉 性 葛”均來自豆科植物野葛，僅在根的粉 性 強 弱 上 有 差 異。“粉性 葛”的 粉性明顯較“柴性葛”高，且多為短粗的紡錘形，性狀上易與“柴性葛”區分。 安徽省１５個產 地 中，產 于 安 徽 寧 國、青 陽、太 湖、銅陵、望江、宿松的葛根為“粉性葛”類型，異黃酮 類成分含量較低，其葛根素含量低于《中華人民共和 國藥典》規 定 的２．４０％。同為“柴 性 葛”的 類 型 中， 其不同產地“柴性葛”異黃酮含量亦有明顯差異，如 安徽明光地區的葛根中葛根素含量約８．１１％，而安 徽宿松地區的葛根中葛根素含量約０．５２％，其差異 可能受產地因素影響。基于含量測定結果，采用主 成分分析和聚類分析對“粉性葛”與“柴性葛”進行分 析，結果表明“粉性葛”與“柴性葛”可以在含量成分 上進行區分。因此在臨床用藥時除了需要關注葛根 的產地，同時需要關注葛根的性狀。 葛根為藥食兩用中藥，由于葛根的需求量巨大， 野生資源逐漸減少。考慮到“柴性葛”與“粉性葛”不 僅粉性上有差異，其所含的異黃酮化合物含量也有 明顯差異。因此建議食用葛根時應選“粉性葛”，以 合理利用其根中豐富的淀粉，而藥用的葛根應選 用“柴 性 葛”，以充分 利用其豐富的異黃酮化合物含量。