生化培養(yǎng)箱對(duì)于枯萎病病原菌室內(nèi)毒力測(cè)定

橡膠樹(shù)( Hevea brasiliensis) 生產(chǎn)的乳膠是我國(guó)重要的戰(zhàn)略資源，隨著橡膠樹(shù)種植年代增加及周邊生態(tài) 環(huán)境變化，一些新的病蟲(chóng)害逐漸顯現(xiàn)出來(lái)。2017 年在對(duì)海南省瓊中加釵農(nóng)場(chǎng)橡膠樹(shù)的病情調(diào)查中發(fā)現(xiàn) 尖孢鐮刀菌( Fusarium oxysporum) 引起了橡膠樹(shù)枯萎病。該病導(dǎo)致橡膠幼樹(shù)頂梢自上而下回枯變褐，呈現(xiàn) “半邊死”癥狀。枯死枝條莖干木質(zhì)部髓心變褐，木質(zhì)部橫切面有零散分布的藍(lán)變癥狀。

1 材料與方法

1． 1 材料

供試菌種: 供試尖孢鐮刀菌( Fusarium oxysporum) 分離于海南省瓊中加釵農(nóng)場(chǎng)熱研 7 － 33 － 97 橡膠樹(shù)幼樹(shù)枝條。供試藥劑: 97． 3 % 咪鮮胺( prochloraz) 原藥購(gòu)自江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司; 97 % 異菌脲( iprodione) 原藥購(gòu)自江蘇快達(dá)農(nóng)化股份有限公司; 96 % 百菌清( chlorothalonil) 原藥購(gòu)自山東青島 奧迪斯生物科技有限公司; 96% 吡唑醚菌酯( pyraclostrobin) 購(gòu)自海南正業(yè)中農(nóng)高科股份有限公司; 97． 2 % 多菌靈( carbendazim) 原藥購(gòu)自江蘇省太倉(cāng)市農(nóng)藥廠; 99 % 水楊羥肟酸( SHAM) 購(gòu)自上海麥克林 生化科技有限公司。將各原藥配成10 000 mg·L － 1 的母液，4 ℃保存。供試培養(yǎng)基: PDA( 馬鈴薯葡萄糖瓊 脂) 培養(yǎng)基: 馬鈴薯 200 g，葡萄糖 15 g，瓊脂粉 15 g，蒸餾水 1 000 mL，滅菌備用。

1． 2 方法

1． 2． 1 含藥平板的制備

分別取各藥劑母液加入到定量的 PDA 培養(yǎng)基中搖晃混勻，使培養(yǎng)基含咪鮮胺的濃度為 0，0． 1，0． 5，1，5，10 mg·L － 1 ，含百菌清的濃度為 0，1，2，4，8，16 mg·L － 1 ，含吡唑嘧菌酯的濃度 為 0，0． 1，0． 5，1，5，10 mg·L － 1 ( 為降低旁路呼吸途徑對(duì)藥劑的影響，供試培養(yǎng)基中加入終濃度為 100 mg·L － 1 的水楊羥肟酸) ，含多菌靈的濃度為 0，0． 1，0． 5，1，5，10 mg·L － 1 。將含藥培養(yǎng)基倒入滅菌的 培養(yǎng)皿中，每皿 20 mL，每個(gè)處理設(shè)置 3 個(gè)重復(fù)。

1． 2． 2 處理方式

取制作好的含藥平板，空白對(duì)照為不加藥劑的 PDA 平板。使用 5 mm 打孔器在 PDA 培養(yǎng)基上 28 ℃培養(yǎng) 2 d 的病原菌菌落邊緣取菌碟，分別接于處理培養(yǎng)基平板的中心位置上，每個(gè)處理 做 3 個(gè)重復(fù)，放置于 28 ℃生化培養(yǎng)箱（上海精宏SHP-080生化培養(yǎng)箱）內(nèi)培養(yǎng)，于對(duì)照組菌落生長(zhǎng) 6 ～ 7 cm 時(shí)，用十字交叉法測(cè)量菌落直徑 并記錄。

1． 2． 3 藥劑復(fù)配

選取 2 種藥效作用較好的藥劑進(jìn)行復(fù)配，以 EC50濃度按照不同比例配比，配比為 1∶ 1， 1∶ 3，1∶ 5，3∶ 1，5∶ 1。再在不同比例配比下設(shè)置 5 個(gè)濃度梯度，濃度稀釋按照逐級(jí)稀釋法稀釋濃度，實(shí)驗(yàn)按 照 1． 2． 2 和 1． 2． 3 中所述方法進(jìn)行。

1． 2． 4 數(shù)據(jù)處理

使用 EXCEL2016，DPS7． 05 數(shù)據(jù)處理軟件對(duì)所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，得出各藥劑的 毒力回歸方程、EC50和相關(guān)系數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2． 1 4 種殺菌劑對(duì)橡膠樹(shù)枯萎病病原菌的抑制效果

4 種殺菌劑對(duì)橡膠樹(shù)枯萎病病原菌的抑制效果見(jiàn) 表 1。由表 1 可見(jiàn)，4 種常見(jiàn)殺菌劑對(duì)尖孢鐮刀菌絲的生長(zhǎng)抑制效果為: 咪鮮胺 ＞ 多菌靈 ＞ 吡唑醚菌酯 ＞ 百菌清。結(jié)果表明，麥角甾醇合成抑制劑類(lèi)殺菌劑的咪鮮胺和有機(jī)雜環(huán)類(lèi)( 苯并咪唑類(lèi)) 殺菌劑的多菌靈 對(duì)尖孢鐮刀菌具有較高的抑制活性，故選擇咪鮮胺和多菌靈作為單劑進(jìn)行下一階段的復(fù)配實(shí)驗(yàn)。

2． 2 復(fù)配殺菌劑對(duì)橡膠樹(shù)枯萎病病原菌的抑制效果

復(fù)配殺菌劑對(duì)橡膠樹(shù)枯萎病病原菌的抑制效果見(jiàn) 表 2，由表 2 可見(jiàn)，咪鮮胺和多菌靈 1∶ 1，1∶ 3，1∶ 5，3∶ 1 及 5∶ 1 復(fù)配條件下 EC50值分別為 0． 96，0． 71，0． 17， 0． 87，1． 01 mg·L － 1 ，1∶ 5 的復(fù)配效果最佳，5∶ 1 的復(fù)配效果最差。咪鮮胺和多菌靈的復(fù)配增效系數(shù)見(jiàn)表 3，由表 3 可見(jiàn)，咪鮮胺和多菌靈 1∶ 1，1∶ 3，3∶ 1 及 5: 1 復(fù)配條件 下增效系數(shù)分別為 0． 92，1． 37，0． 92，0． 77，均在 0． 5 ～ 1． 5 之間，2 者藥效作用為相加作用，無(wú)拮抗作用。 咪鮮胺和多菌靈配比在 1∶ 5 時(shí)，SＲ 值為 6． 01，表現(xiàn)為增效作用。

3 討 論

對(duì) 4 種常見(jiàn)殺菌劑對(duì)橡膠樹(shù)尖孢鐮刀菌絲的生長(zhǎng)抑制進(jìn)行了測(cè)定，除百菌清外，咪鮮胺、多菌 靈、吡唑醚菌酯抑制菌絲效果顯著。其中麥角甾醇合成抑制劑類(lèi)殺菌劑的咪鮮胺和有機(jī)雜環(huán)類(lèi)( 苯并咪 唑) 殺菌劑的多菌靈對(duì)橡膠樹(shù)尖孢鐮刀菌的抑菌效果尤為突出，故選擇咪鮮胺和多菌靈進(jìn)行復(fù)配實(shí)驗(yàn)，通 過(guò) 5 種不同比例復(fù)配得出的抑菌效果來(lái)看，其中咪鮮胺: 多菌靈為 1∶ 5 的復(fù)配效果最佳，表現(xiàn)為增效作用， 并且 EC50達(dá)到了 0． 17 mg·L － 1 ，效果優(yōu)于任何一種單劑。 綜上所述，橡膠樹(shù)枯萎病可由常用藥劑進(jìn)行防治，鑒于咪鮮胺與多菌靈的復(fù)配效果尤為突出，推薦在 病害發(fā)生時(shí)采用，避免單一藥劑的過(guò)度使用所導(dǎo)致病菌抗藥性的增強(qiáng)。



 

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