恒溫水浴鍋在芐嘧磺隆的抗藥性的使用

水稻在我國糧食生產中占主要地位，其產量的保證 對我國糧食豐收具有重大意義。目前，影響我國水稻產 量的雜草主要有23種，其中螢藺對水稻的危害極其嚴 重。螢藺(Scirpus juncoides Roxb.)又名燈心藨草，是稻田 多年生濕生性莎草科雜草，以種子繁殖為主，具有旺盛的 生命力、驚人的繁殖能力、頑強的低抗力和再生能力，適應 干燥、耐澇、嚴寒、鹽堿等惡劣環境，并與水稻競爭生態 環境。芐嘧磺隆(bensulfuron-methyl)是稻田常用的乙酰乳 酸合成酶(ALS)抑制劑類除草劑，主要防除一年生和多年 生闊葉雜草和莎草等，長期重復使用致使雜草對其產生 了抗藥性，目前全球已對芐嘧磺隆產生抗藥性雜草已有 28種。

采自東北三省多年使用芐嘧磺隆的稻田里的螢藺 種子，具體地點及用藥歷史見表1。

1.1.2 供試藥劑

10%芐嘧磺隆可濕性粉劑(bensulfuron-methyl WP)， 上海杜邦農化有限公司；BCA Protein Assay Kit，康為世 紀生物科技有限公司；3-羥基丁酮(acetoin)標樣、甲基磺 酰氟液(phenylmethylsulphonyl fluoride，PMSF)、二硫蘇糖 醇 (dithiothreito，DTT)、可溶性聚乙烯吡咯烷酮(soluble PVP)、N-(2 -羥乙基) 哌嗪-N′ -2 -乙烷磺酸 [N-(2 - hydroxyethyl) piperazine -N -(2 -ethanesulphonic acid)， HEPES]，北京索萊寶科技有限公司；肌酸、氯化硫胺素焦 磷酸(thiamine pyrophosphate，TPP)、黃素腺嘌呤二核苷酸 (flavin adenine dinucleotide，FAD)，美國Sigma-Aldrich公 司；MgCl2、K2HPO4、a-萘酚、硫酸銨等，國藥集團化學試劑 有限公司。

噴筆，型號F-470，臺灣美事連公司；4、-20 ℃冰箱， 中國海爾集團；-80 ℃冰箱，美國Thermo Forma公司； 制冰機，日本SANYO公司；SpectraMax 190酶標儀，美國 Molecular Devices公司；高速冷凍離心機(臺式)，美國 Beckman公司；DK-S26型電熱恒溫水浴鍋，上海精宏實驗設備有限公司。

將不同種群螢藺種子置于鋪有雙層濾紙的培養皿 中，5 ℃冰箱清水浸泡48 h之后，50 ℃恒溫浸泡12 h洗 凈，打破休眠，之后用清水將種子沖洗干凈，進行萌發試 驗(白天/夜晚：30 ℃/26 ℃，濕度：60%~75%，光照/黑暗： 12 h/12 h)培養，每隔48 h用溫水沖洗，去除種子表面油脂和蠟脂層。發芽后的螢藺種子種于直徑10 cm、高8.5 cm塑 料無孔花盆內，蓋上細土，每個種群播種3盆，放于溫室 中培養，當螢藺長到2~3葉期時，將10%芐嘧磺隆稀釋成 不同的劑量(有效含量)，對敏感性螢藺種群噴施0、0.45、 1.8、9、45、225 g a.i./hm2 6個劑量，對抗藥性螢藺種群噴施 0、1.8、9、45、225、1125 g a.i./hm2 6個劑量，3次重復。對水量為 450 L/hm2 ，噴霧壓力為0.25 MPa。

施用芐嘧磺隆后21 d，隨著施藥量的增加，螢藺各種 群鮮重均受到不同程度的抑制，20個螢藺種群對 芐嘧磺隆的抗藥性水平差異較大，其中R7、R17和R18抗 藥性指數高達90以上；R8、R13、R14和R19對芐嘧磺隆抗 藥性達到中等水平；R2、R4和R10對芐嘧磺隆產生低等 水平的抗藥性，其他種群對其均產生高等水平的抗藥性。離體條件下對螢藺種群ALS酶活性測定，結果顯示， 未使用芐嘧磺隆時，種群R2、R4、R8、R10、R14、R18和 R19的ALS活性與敏感性螢藺種群S無顯著差異，R1、R7、 R11、R17和R20螢藺種群的ALS活性顯著高于敏感性螢 藺種群S，其他R種群的ALS活性與敏感性螢藺種群S均有 不同的差異性。不同螢藺種群ALS酶對芐嘧磺隆 敏感性不同，隨著芐嘧磺隆濃度的提高，20個不同種群 的螢藺ALS酶活性下降程度不同，其中敏感性種群S下降 最為迅速。

研究結果表明：20個螢藺種群對芐嘧磺隆產生了不 同程度的抗藥性，未使用芐嘧磺隆時，不能通過比較ALS 活性高低判斷雜草是否為抗藥性雜草或者比較其抗藥 性水平的高低；使用芐嘧磺隆時，螢藺種群的ALS對芐嘧 磺隆的敏感性均有所降低，與整株生物測定的雜草抗藥 性降低趨勢一致，因此，螢藺產生抗藥性的原因可能是 ALS對芐嘧磺隆敏感性的降低所致，與有關雜草對ALS抑 制劑產生抗藥性的研究結論基本一致。