隨著社會、經濟的發展，氮元素通過各種途徑進人水體，成為水體主要污染元素
［１］。水體中氮含量過高會導致水體富營養化
［２］，破壞水生態系統。水體脫氮方法主要有物理、化學和生物方法。生物脫氮因其具有高效、經濟和無二次污染等優點，應用廣泛
［３］。目前，生物脫氮研究的熱點主要是異養硝化－好氧反硝化脫氮。該法相比傳統生物脫氮具有以下優勢：
１）在好氧條件下能同時進行硝化和反硝化作用
［５］，提高了經濟效益；２）硝化作用消耗的堿度可由反硝化作用產生的０Ｈ補償，維持系統ｐＨ穩定
［６］；３）能直接利用水體中的有機碳作為脫氮所需碳源，脫氮同時降低ｃ〇Ｄ［７］等。正是由于這些優勢，異養硝化－好氧反硝化菌具有具有廣闊的應用前景。本研究利用溴百里酚培養基從環境中初篩出７株好氧反硝化菌，然后以Ｎ０３－Ｎ為唯一氮源進行復篩，從中優選出一株異養硝化＿好氧反硝菌株Ｆ２，通過１６ｓＲＮＡ分子鑒定法對Ｆ２進行種屬鑒定。再分別以Ｎ０３－Ｎ、Ｎ０２－Ｎ、ＮＨ：－Ｎ為唯一氮源培養菌株Ｆ２，考察菌株Ｆ２在不同好氧反硝化體系中對氮源的降解效率。基于硝化－反硝化的主要發生場所，各菌種分別取自廣州市瀝滘污水處理廠曝氣池活性污泥、廣州市東山湖湖底沉積物、深圳市坪山垃圾填埋場垃圾滲濾液。取３個２５０ｍＬ錐形瓶，每個瓶中加人１００ｍＬ富集培養基及若干玻璃珠，滅菌，再分別向每個瓶中移人５ｍＬ沉積物、活性污泥、滲濾液。置于３０°Ｃ，１５０ｒ／ｍｍ的恒溫搖床中振蕩培養５ｄ，每隔２４ｈ向富集培養液中加人１ｍＬ５％ＮａＮ０３溶液和１ｍＬ５％（ＮＨ４）２Ｓ０４溶液，做３個平行樣。培養完成后，將富集培養液在無菌操作臺中進行梯度稀釋。選擇合適稀釋倍數（１０５、１〇６、１〇７）的菌懸液，取１ｍＬ均勻涂布于ＢＴＢ培養基上，置于３０°Ｃ的
恒溫培養箱中培養１￣２ｄ，每個梯度做三組平行樣。將周圍長有藍色暈圈或變藍的菌落挑出在ＬＢ固體培養基上劃線，將劃線后的培養基放人３０°Ｃ的恒溫培養箱中培養１￣２ｄ，對長出的菌落再次進行平板劃線，重復平板劃線多次以得到純菌。將分離得到的純菌株接種到ＬＢ斜面培養基，４°Ｃ保存。將菌株革蘭氏染色，置于光學顯微鏡下觀察，革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。具體步驟如下：１）在經酒精消毒的載玻片上滴加一滴蒸餾水，用接種環挑取適量菌苔均勻涂布于水滴中；２）將載玻片置于酒精燈上方烘干，通過火焰２￣３次，使細菌固定于載玻片上；３）向載玻片上的細菌固定處滴加結晶紫溶液進行初染，靜置約１分鐘，用蒸餾水洗凈；４）滴加碘液進行煤染，并靜置約１ｍｍ，水洗后并用濾紙吸干；５）使用９５％的酒精進行流滴脫色，時間大約為２０￣３０ｓ，接著立即用水沖凈；６）最后使用蕃紅溶液進行復染３￣５ｍｍ，之后用水沖凈，待載玻片干燥；７）使用油鏡進行鏡檢。
